实验材料:培养基A(DMEM/F12+10%FBS);培养基B(DMEM/F12,5ug/ml牛胰岛素,50ug/ml转铁蛋白,5ug/ml亚硒酸钠和50ng/ml氢化可的松);消化液:0.1%胰酶,0.2%一型胶原酶。
前脂肪细胞的分离及诱导:
1. 取人脂肪组织约3g,用PBS缓冲液冲洗3次,除去脂肪组织中可见的结缔组织和血管
2. 把脂肪组织尽量剪碎,再用PBS缓冲液冲洗3次
3. 加入事先配好的消化液5ml,在37℃恒温摇床消化大约50min
4. 当消化液呈乳浊状,脂肪组织完全消化完后,加入培养基A终止消化,并吹打均匀
5. 用80目滤网过滤,1500rpm离心5min,弃上清
6. 向沉淀加入4ml培养基A并重悬,接种进25方瓶于37℃,5%CO2培养箱中培养
7. 第三天第一次换液,待细胞占据瓶底70%左右,换培养基B进行诱导
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