上周小编分享到，植物miRNA靶基因鉴定的王牌方法是降解组测序。miRNA调控其靶基因表达的方式在植物与动物中的差异——在动物体内以基因的翻译抑制居多，在植物体内则以靶基因被剪切占多数——使得降解组测序更适合运用在植物研究中。然而，动物中miRNA的靶基因就不能用降解组测序来鉴定了吗？实则不然，下面一起来看一些降解组测序在动物研究中的应用。
Dynamic expression of miRNAs acrossimmature and adult stages of the malaria mosquito Anopheles stephensi
斯氏按蚊幼虫与成虫中miRNAs的动态表达
发表期刊：Parasites & Vectors
年份：2015
背景：
斯氏按蚊是亚洲疟原虫的主要宿主，具有四个不同发育阶段、完全变态的生命周期。然而疟蚊miRNAs在蚊子不同发育阶段的作用和机制尚不明确。
取材：
雄性和雌性四龄幼虫、蛹、5-6天成虫，共六组样本
方法：
a.六组样本进行小RNA文库构建，发现鉴定miRNAs，并对其差异表达进行统计学分析。
b.4-5天雌性疟蚊分别注射PBS、RNA干扰剂、miR989拮抗剂，提取疟蚊卵巢组织进行实时定量PCR
c.使用Northern杂交和实时定量PCR技术对5-6天雌性成虫进行进一步验证。
d.降解组测序鉴定miRNAs降解靶基因，探究miRNAs在昆虫发育中的调控作用。
工具：
小RNA测序、降解组测序、Northern杂交、实时定量PCR
图表展示：
图 miRNAs在不同发育阶段的差异表达热图
图 六个不同样本中miRNAs的表达
结果：
１.小RNA测序及数据分析显示，在斯氏按蚊所有发育阶段，共发现了111个已知miRNAs和14新miRNAs，其中有9个miRNAs呈现出性别差异性。在雄性和雌性疟蚊的不同发育阶段中，分别发现24个和26个miRNAs的调控方式。
２.降解组测序结果显示，共发现昆虫miRNAs的29个靶基因。与成年雄性蚊子相比，miR989在成年雌性蚊中显著上调表达。
３.成年雌性蚊敲除miR989后，其靶基因在卵巢组织中蛋白结合，蛋白质水解和核酸合成中发挥作用。
结论：
第一次全面探索斯氏按蚊雄性和雌性蚊发育阶段miRNAs的调节作用。靶基因预测和通路分析初步揭示出miRNAs在蚊子发育过程中的调控作用。本研究对减少蚊媒传染病的传播，有效控制蚊子种群的方式具有深远的启发意义。
降解组测序在动物中应用的案例
1.Diverse endonucleolytic cleavage sites in the mammalian transcriptomedepend upon microRNAs, Drosha, and additional nucleases
期刊：molecular cell
年份：2010
2.Global analysis of the mammalian RNA degradome reveals widespread miRNA-dependent and miRNA-independent endonucleolytic cleavage
期刊：Nucleic Acids Research
年份：2011
3.Signature miRNAs Involved in the Innate Immunity of Invertebrates
期刊：PLoS ONE
年份：2012
4.Global analyses of endonucleolytic cleavage in mammals reveal expanded repertoires of cleavage-inducing small RNAs and their targets
期刊：Nucleic Acids Res
年份：2016
以上是部分降解组测序在动物研究中的应用，研究中利用降解组测序获得的miRNA剪切调控的靶基因数量少，然而一切的存在均有它存在的意义。也许在研究中能发现一些新奇有意思的功能和调控机制，这谁又知道呢？等你来探寻~
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